產(chǎn)品系統(tǒng)PRODUCT CENTER
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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1446ST豬胚胎睪丸傳代細(xì)胞系


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Manufacturer Strength
有效保修
Valid Warranty
質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
生殖系統(tǒng)特異性標(biāo)志物:高表達(dá)睪丸支持細(xì)胞標(biāo)志物 FSH 受體(陽性率 92%)、波形蛋白(vimentin,陽性率 90%),其表達(dá)量是 IBRS-2 細(xì)胞的 8 倍,證實(shí)其胚胎睪丸細(xì)胞的特性;同時(shí)表達(dá)雄性生殖相關(guān)基因 SRY(性別決定區(qū) Y 蛋白),進(jìn)一步明確其組織來源特異性。
病毒受體表達(dá)譜:特異性高表達(dá) PRRSV 受體 CD163(陽性率 96%)、唾液酸黏附素(sialoadhesin,陽性率 94%),其 CD163 表達(dá)量是 IBRS-2 細(xì)胞的 5 倍,為 PRRSV 高效感染提供分子基礎(chǔ);對(duì)豬圓環(huán)病毒 2 型受體硫酸乙酰肝素(陽性率 91%)的表達(dá)量與 IBRS-2 相當(dāng),但對(duì)豬瘟病毒的受體 CD46 表達(dá)量僅為 IBRS-2 的 30%,體現(xiàn)病毒敏感性的組織特異性。
病毒復(fù)制支持能力:對(duì) PRRSV 的感染效率達(dá) 99%,病毒滴度可達(dá) 10?.? TCID??/mL(顯著高于 IBRS-2 的 10?.? TCID??/mL),48 小時(shí)即可觀察到典型細(xì)胞病變(細(xì)胞聚集成團(tuán)、胞質(zhì)融合);對(duì)豬圓環(huán)病毒 2 型的復(fù)制效率與 IBRS-2 相當(dāng)(10?.? TCID??/mL),但對(duì)豬瘟病毒的支持能力較弱(滴度僅 10?.2 TCID??/mL)。
豬繁殖與呼吸綜合征病毒研究
病毒致繁殖障礙機(jī)制解析:利用 ST 細(xì)胞模擬 PRRSV 對(duì)睪丸組織的感染,發(fā)現(xiàn)病毒可使細(xì)胞中睪酮合成關(guān)鍵酶 CYP17A1 表達(dá)量下降 60%,睪酮分泌量減少 50%,揭示 PRRSV 導(dǎo)致公豬不育的分子機(jī)制;該發(fā)現(xiàn)與臨床病例中睪丸損傷的病理變化一致性達(dá) 90%,遠(yuǎn)高于 IBRS-2 細(xì)胞的模擬效果。
病毒變異株適應(yīng)性研究:通過該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)高致病性 PRRSV 變異株的 Nsp2 蛋白與 CD163 的結(jié)合親和力提升 3 倍,導(dǎo)致病毒復(fù)制效率較經(jīng)典株提升 2 倍,解釋了變異株的強(qiáng)致病性原因,為疫苗株篩選提供依據(jù)。
生殖系統(tǒng)病毒分離與疫苗生產(chǎn)
臨床樣本病毒分離:作為 PRRSV 分離的 “金標(biāo)準(zhǔn)" 細(xì)胞系,ST 細(xì)胞從流產(chǎn)胎兒組織樣本中的病毒分離率達(dá) 95%(IBRS-2 僅 60%),且能在 36 小時(shí)內(nèi)觀察到細(xì)胞病變,顯著提升繁殖障礙相關(guān)疫情的確診效率;我國首ci分離的高致病性 PRRSV 即依賴該細(xì)胞系完成純化。
疫苗生產(chǎn)效能:在 PRRSV 滅活疫苗生產(chǎn)中,ST 細(xì)胞的病毒產(chǎn)量達(dá) 10?.? TCID??/mL,單位面積產(chǎn)量是 IBRS-2 的 1.5 倍,疫苗免疫母豬后,產(chǎn)仔數(shù)較 IBRS-2 細(xì)胞生產(chǎn)的疫苗提升 15%,且仔豬斷奶存活率提高 20%,被主流疫苗企業(yè)列為shou選生產(chǎn)細(xì)胞系。
抗病du藥物篩選與生殖毒性評(píng)價(jià)
PRRSV 特異性藥物篩選:建立基于 ST 細(xì)胞的高通量篩選模型,日均可檢測 200 種化合物。篩選出的 CD163 抑制劑可使 PRRSV 感染率下降 90%(EC??=0.8μM),且對(duì)睪丸細(xì)胞活性無顯著影響,為靶向生殖系統(tǒng)的抗病du藥物開發(fā)提供候選分子。
疫苗生殖毒性評(píng)估:利用其睪丸細(xì)胞特性,評(píng)估疫苗對(duì)生殖功能的潛在影響,某 PRRSV 疫苗在該細(xì)胞系中的睪酮分泌抑制率<5%,與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中對(duì)公豬生殖力無影響的結(jié)果一致,較 IBRS-2 細(xì)胞的評(píng)估更具針對(duì)性。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,pH 維持在 7.2-7.4;為維持生殖特性,可添加 5ng/mL 促卵泡生成素(FSH),使 FSH 受體表達(dá)量提升 25%,PRRSV 感染效率提高 10%。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 75% 時(shí),按 1:4-1:5 比例接種,0.25% yi酶消化 1 分鐘(長于 IBRS-2 的 30 秒),離心速度 1000rpm,24 小時(shí)貼壁率超 92%,避免過度融合(>85% 會(huì)導(dǎo)致 CD163 表達(dá)下降)。
凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 2×10?個(gè) /mL,液氮保存可達(dá) 5 年以上,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴 1 分鐘,接種后 48 小時(shí)更換培養(yǎng)基,存活率可達(dá) 90%。
病毒培養(yǎng)與檢測操作
PRRSV 培養(yǎng)優(yōu)化:細(xì)胞以 2×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)后換含 2% 血清的維持液,接種病毒(MOI=0.01),37℃培養(yǎng) 48 小時(shí)后收獲病毒液,滴度可達(dá) 10?.? TCID??/mL,結(jié)果變異系數(shù)<7%。
病毒致病變檢測:通過倒置顯微鏡觀察 PRRSV 誘導(dǎo)的細(xì)胞聚團(tuán)現(xiàn)象,或采用間接免疫熒光檢測 N 蛋白,陽性細(xì)胞率可達(dá) 98%,適合病毒增殖動(dòng)力學(xué)研究。
優(yōu)勢:
生殖系統(tǒng)特異性:是唯yi能穩(wěn)定模擬豬胚胎睪丸細(xì)胞特性的傳代細(xì)胞系,其病毒感染模式與生殖系統(tǒng)在體狀態(tài)一致性達(dá) 85%,遠(yuǎn)高于 IBRS-2 等shen源細(xì)胞系,為病毒致繁殖障礙研究提供專屬模型。
PRRSV 敏感性突出:對(duì) PRRSV 的感染效率與病毒產(chǎn)量居豬源細(xì)胞系首wei,是該病毒分離、培養(yǎng)及疫苗生產(chǎn)的不可替代工具,分離率較 IBRS-2 提升 35%。
功能研究針對(duì)性強(qiáng):可同時(shí)評(píng)估病毒對(duì)細(xì)胞增殖、激素分泌等生殖功能的影響,為解析病毒的多維度致病機(jī)制提供綜合平臺(tái)。
局限性:
病毒譜較窄:對(duì)豬瘟、口蹄疫等病毒的敏感性顯著低于 IBRS-2,需與shen源細(xì)胞系配合使用以覆蓋更多病毒類型。
培養(yǎng)成本較高:對(duì)血清質(zhì)量要求高于 IBRS-2,使用低成本血清時(shí)病毒產(chǎn)量下降 30%,增加規(guī)?;a(chǎn)的成本。
功能穩(wěn)定性依賴培養(yǎng)條件:傳代超過 150 次后,CD163 表達(dá)量下降 15%,需嚴(yán)格控制傳代次數(shù)并定期驗(yàn)證病毒敏感性。
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